流感諮詢:瞭解RT-PCR檢驗方法的原理和應用-流感諮詢

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一個專業的問題?


在報章雜誌上看到檢驗SARS的方法,RT-PCR那是甚麼東西呢??是甚麼原理啊???



小矮,30~39歲男性,詢問日期:2003/05/31

柯政欽 醫師回覆-流感諮詢


RT-PCR 是一種技術名稱的縮寫,全名是Reverse transcriptase polymerase chain reaction,因為這種技術是外國人發明的,所以有英文名字。
這種技術的出現是為了解決以下的難題:比如我們如何知道血液裡面是否有沒有某種病毒的存在?
如何檢驗呢?
很難吧!早期的做法是做病毒培養,可是如果血液裡面病毒含量不多時,很難培養出來,這時怎麼辦呢?
於是有聰明人想出RT-PCR的方法解決了著個問題,做法大致如下:病毒含量不多是吧!那我就讓病毒自行複製,一變二,二變四,四變八------- ,在實驗室裡提高病毒含量,如此以利後續檢驗。
所以只要血液裡面有少量的病毒,就可以利用RT-PCR的方法,檢測出有無病毒,如果血液中無病毒存在,自然沒有病毒自行複製,因此RT-PCR的結果為陰性。



回覆日期:2003/05/31

彙整補充說明


RT-PCR(反轉錄聚合酶鏈反應)是一種分子生物學技術,主要用於檢測和擴增特定的RNA序列。
這項技術的原理是將RNA轉錄成互補DNA(cDNA),然後利用聚合酶鏈反應(PCR)來擴增這些cDNA,以便進行後續的檢測和分析。
RT-PCR的應用範圍非常廣泛,特別是在病毒檢測方面,如流感病毒、SARS-CoV-2(新冠病毒)等。

RT-PCR的基本步驟如下:
1. RNA提取:首先,從樣本(如血液、咽喉拭子等)中提取RNA。
這一步驟是關鍵,因為只有提取到的RNA才能進行後續的反轉錄和擴增。

2. 反轉錄:提取的RNA會被轉錄成cDNA,這是由於RNA本身不穩定,且PCR技術主要是針對DNA進行擴增,因此需要這一步驟。

3. 聚合酶鏈反應(PCR):接下來,使用特定的引子(primer)和DNA聚合酶來擴增cDNA。
這個過程會在高溫和低溫之間反覆循環,使得cDNA數量指數增長。

4. 檢測:最後,擴增的DNA可以通過各種方法進行檢測,如荧光染料、電泳等,來確認是否存在特定的病毒RNA。

RT-PCR的優勢在於其高靈敏度和特異性,能夠檢測到非常低濃度的病毒RNA,這使得它在早期診斷中非常有效。
然而,RT-PCR並非百分之百準確,仍可能出現假陰性或假陽性的情況。
假陰性可能發生在樣本採集不當、病毒量過低或檢測過程中的技術問題等情況下。

在流感的檢測中,RT-PCR能夠快速且準確地識別流感病毒,這對於及早治療和控制疫情非常重要。
由於流感的症狀與其他呼吸道病毒感染(如普通感冒或新冠病毒)相似,RT-PCR提供了一種可靠的方式來區分這些病毒。

總結來說,RT-PCR是一項強大的檢測工具,尤其在公共衛生和臨床診斷中發揮著重要作用。
隨著技術的進步,RT-PCR的應用範圍也在不斷擴大,未來可能會在更多的疾病檢測中發揮關鍵作用。
對於流感和其他病毒的早期檢測,RT-PCR無疑是目前最有效的技術之一。

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